Sigma-Aldrich Cysteine Sulfenic Acid Probe (DCP-Bio1)

产品概述

某些蛋白质中的半胱氨酸残基可以瞬时氧化为半胱氨酸次磺酸，并且这种氧化事件可能影响酶活性，从而调节信号传导途径。大多数含有半胱氨酸次磺酸的蛋白质仅在细胞含有升高水平的活性氧时才这样做，尽管一些蛋白质，如GAPDH，在普通条件下似乎含有半胱氨酸次磺酸。用于评估蛋白质是否被修饰为含有半胱氨酸次磺酸的最常用的方法采用用5，5-二甲基-1，3-二氢-1H-吡喃-4-酮衍生化，DCP-Bio 1是一种用于鉴定细胞内半胱氨酸次磺酸的试剂，它由生物素上的次磺酸反应性3-（2，4-二氧代环己基）丙基（DCP）组成。

应用领域

方案解决方案：DCP-Bio 1储备液将小瓶的全部内容物重悬于10 µL DMSO中，最终浓度为250 mM储备裂解缓冲液50 mM Tris-HCl，pH 7.5 100 mM氯化钠0.1% SDS 0.5%脱氧胆酸钠0.5% NP-40 0.5% Triton X-100工作裂解缓冲液在试验当天，向储备裂解缓冲液中补充：50 mM氟化钠1 mM PMSF 1 mM DCP-Bio 1 100 µM DTPA（二亚乙基三胺五乙酸）10 mM N-乙基马来酰亚胺10 mM碘乙酰胺200 U/mL过氧化氢酶1x蛋白酶抑制剂混合物细胞处理和裂解：1）将贴壁细胞接种在100 mm细胞培养皿中，2）在选择的处理前30分钟更换为新鲜的生长培养基。3）用10 mL 1x PBS洗涤所有平板2次。4）向平板中加入150 µL工作裂解缓冲液并刮取细胞。5）将裂解物在冰上孵育1-2小时。6）以10，000 rpm转速将裂解物离心10分钟并收集上清液。7）使用Bio-Rad P6-Spin色谱柱去除未反应的DCP-Bio 1和其他小分子（PN：732-6227）按照制造商的说明进行。8）测量蛋白浓度。9）进行感兴趣的生化分析。

解决方案：DCP-Bio 1储备液将小瓶的全部内容物重悬于10 µL DMSO中，最终浓度为250 mM储备裂解缓冲液50 mM Tris-HCl，pH 7.5 100 mM氯化钠0.1% SDS 0.5%脱氧胆酸钠0.5% NP-40 0.5% Triton X-100工作裂解缓冲液在试验当天，向储备裂解缓冲液中补充：50 mM氟化钠1 mM PMSF 1 mM DCP-Bio 1 100 µM DTPA（二亚乙基三胺五乙酸）10 mM N-乙基马来酰亚胺10 mM碘乙酰胺200 U/mL过氧化氢酶1x蛋白酶抑制剂混合物细胞处理和裂解：1）将贴壁细胞接种在100 mm细胞培养皿中，2）在选择的处理前30分钟更换为新鲜的生长培养基。3）用10 mL 1x PBS洗涤所有平板2次。4）向平板中加入150 µL工作裂解缓冲液并刮取细胞。5）将裂解物在冰上孵育1-2小时。6）以10，000 rpm转速将裂解物离心10分钟并收集上清液。7）使用Bio-Rad P6-Spin色谱柱去除未反应的DCP-Bio 1和其他小分子（PN：732-6227）按照制造商的说明进行。8）测量蛋白浓度。9）进行感兴趣的生化分析。

制备/使用说明

本品可在-20 ° C下储存。干粉，如果未开封并妥善储存，自接收之日起至少可使用4个月。一旦重新悬浮，DCP-Bio-1溶液应在-20 ° C下避光储存。毒性：虽然该化合物似乎毒性较低，它还没有被广泛的评估，因此，实验室的常规操作应该谨慎。不适合人类食用。重要提示：在运输过程中，少量产品偶尔会被截留在产品小瓶的密封中。对于质量为5 mg或更少的产品，我们建议在硬表面上轻轻敲击小瓶或将小瓶放入台式离心机中，以去除容器盖中的任何粉末。

分析说明

DCP-Bio 1纯度：通过1H NMR测定，纯度≥ 90%。DCP-Bio 1溶解度：易溶于DMSO

其他说明

DCP-Bio 1（部件号CS211419）：1 mg干粉，储存在氩气下。

技术规格