Sigma-Aldrich TEV蛋白酶

产品概述

TEV蛋白酶具有(NIa)蛋白酶催化结构域，对应分子量27 kDa。其具有独特的高特异性，并在低温下具有活性。

烟草蚀刻病毒（TEV）蛋白酶是从重组蛋白中去除融合标签的一种有用工具。

TEV蛋白酶是烟草蚀刻病毒NIa蛋白酶的一种工程化催化结构域。 TEV蛋白酶是一种属于C4肽酶家族的高度特异性半胱氨酸蛋白酶。

一种含有GST和His标签的经修饰的52 kDa TEV蛋白酶构建体，用于使用谷胱甘肽或His-Select^®亲和介质进行轻松的去除。

应用领域

TEV蛋白酶已用于从稻中去除重组有丝分裂原活化的蛋白激酶14 (MAPK14)、连接蛋白43（Cx43）c端片段和1-吡咯啉-5-羧酸还原酶中的组氨酸标签。它还可用于从人白血病细胞系K562洗脱纯化蛋白酶体。

生化/生理作用

烟草蚀刻病毒(TEV) 蛋白酶经过自溶作用，但TEV蛋白酶突变体具有自溶耐受性。细菌表达重组TEV蛋白酶存在产量和溶解度低的问题。使用绿色荧光蛋白融合TEV蛋白酶可克服这一问题，同时可用于结构基因组学研究。

链霉抗生物素蛋白-琼脂糖上的固定化TEV蛋白酶是融合蛋白切割的一种有效工具。 TEV蛋白酶也用于一项探究nlrp1b的蛋白水解加工用于炎症体活性的研究。 PMID 22536155

TEV蛋白酶具有严格的Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓Gly/Ser7氨基酸切割识别序列。

产品特点

经过优化设计和纯化可在较宽的温度范围内提高稳定性和高比活度。

物理形态

在25 mM Tris HCl，pH 8.0，50 mM NaCl，1 mM NaCl，1 mM TCEP和50%甘油的溶液中以>=2 mg/ml提供

甘油水溶液

制备/使用说明

酶切方法
配制新鲜的透析缓冲液。应针对目标蛋白质的溶解度进行透析缓冲液的优化，并不含有蛋白酶抑制剂。 透析缓冲液应当与下游的纯化过程相兼容，如当采用HIS-Select^®柱去除酶切的组氨酸标签时，尽可能减少EDTA或DTT用量。
适用透析缓冲液示例：25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 - 500 mM NaCl, 14 mM β-巯基乙醇
该TEV蛋白酶在150 mM NaCl或500 mM NaCl以及400 mM咪唑中具有相同的活性。
用透析缓冲液将目标蛋白稀释至1-2 mg/ml。这是为了防止目标蛋白在透析缓冲液中发生聚集的可选步骤。保留少量的样品作为PAGE分析的对照。如通过HIS Select^®柱洗脱目标蛋白并且EDTA与目标蛋白相兼容，则可加入0.5 mM终浓度的EDTA。
按蛋白酶与目标蛋白1:100(w/w)的比例加入TEV蛋白酶，或将10,000单位（1mg）的TEV蛋白酶加入至100 mg的目标蛋白中。无需计算摩尔比例。TEV蛋白酶可被直接加到目标蛋白中。无需更换缓冲液或稀释TEV蛋白酶。最佳的比例应根据经验进行确定。1:50至1:200的蛋白酶与目标蛋白的比例（w/w）可为绝大多数目标蛋白提供有效的范围。
透析缓冲液4 °C透析~16小时。当使用HIS-Select^®或谷胱甘肽亲和柱时去除酶切后的切割标签或TEV蛋白酶时，通过透析去除咪唑或谷胱甘肽。
通常，1mg的TEV蛋白酶16小时内可在4 °C下切割>90%的100 mg对照蛋白。

其他说明

在pH 8.0、温度30 °C条件下，一单位的TEV蛋白酶可在一小时内切割>85% of 3 μg的对照底物。

技术规格