Sigma-Aldrich ChemiSCREEN Membrane Preparation Recombinant Human mGlu 6 Metabotropic Glutamate Receptor

产品概述

谷氨酸是中枢神经系统中主要的兴奋性神经递质，在学习、记忆和神经毒性中发挥作用，其生物学作用由离子型和代谢型谷氨酸受体介导，分别为离子通道和GPCRs，代谢型谷氨酸受体（Metabotropic glutamate receptor，mGluRs）属于第3类G蛋白偶联受体家族，其特征在于大的胞外结构域。基于它们的序列同一性、药理学和信号转导机制，它们被进一步分为I、II和III组mGluRs。I组（mGlu 1和mGlu 5）通过G αq与磷脂酶C途径偶联，而组II通过G αq与磷脂酶C途径偶联。（mGlu 2和mGlu 3）和组III（mGlu 4、mGlu 6、mGlu 7和mGlu 8）通过G αi与腺苷酸环化酶途径负偶联。（Conn和Pin，1997）。mGlu 6局限于与视网膜视杆和视锥突触的ON双极细胞的树突。mGlu 6的靶向缺失导致ON响应的缺陷，但对光的OFF响应不变（Masu等，1995）。此外，人类GRM 6的突变导致某些形式的常染色体隐性遗传先天性静止性夜盲症（Dryja et al.，2005;泽茨et al.，2005）. Chemicon的mGlu 6膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制剂，以确保高水平的GPCR表面表达;该细胞系对L-AP 4、（RS）PPG和L-谷氨酸的EC_（50）分别为6.2 μM、23.4 μM和52.7 μM，膜制备物对L-AP 4、（RS）PPG和L-谷氨酸的EC_（50）分别为4.0 μM、24.1 μM和49.3 μM，在GTPγS结合试验中，

人GRM 6 cDNA

应用领域

用于放射性配体结合试验和GTPγS结合的人mGlu 6 GPCR膜制备。

放射性配体结合试验和GTP γ S结合

生化/生理作用

GPCR分类：C蛋白靶：mGlu 6靶亚家族：谷氨酸（代谢型）

产品特点

Membranes are permeabilized by addition of saponin to an equal concentration by mass, then mixed with [³⁵S]-GTPγS (final concentration of 0.3 nM) in 20 mM HEPES, pH 7.4/100 mM NaCl/10 mM MgCl₂/0.5 μM GDP in a nonbinding 96-well plate. Unlabeled DCG IV, (2R4R) APDC, and glutamate are added to the final concentration indicated in Figure 1 (final volume 100 μL), and incubated for 30 min at 30γC. The binding reaction is transferred to a GF/B filter plate (Millipore MAHF B1H) previously prewetted with water, and washed 3 times (1 mL per well per wash) with cold 10 mM sodium phosphate, pH 7.4. The plate is dried and counted.

One vial contains enough membranes for at least 200 assays (units), where one unit is the amount of membrane that will yield greater than 1000 cpm specific L-AP4, (RS)PPG, or glutamate -stimulated [³⁵S]-GTPγS binding.

The mGlu₆ membrane preparation is expected to be functional in a radioligand binding assay; however, the end user will need to determine the optimal radiolabeled ligand for use with this product.

物理形态

包装缓冲液中的液体：包装方法：将膜蛋白在包装缓冲液中调节至1 mg/ml，快速冷冻，并在-80 ℃下储存。

制备/使用说明

在-70 ° C下冷冻保存长达2年。不要冷冻和解冻。

分析说明

通过谷氨酸进行的GTPγS结合试验中的EC 50：~ 49.3 μM通过（RS）进行的GTPγS结合试验中的EC 50 PPG：~ 24.1 μM通过L-AP 4进行的GTPγS结合试验中的EC 50：~ 4.04 μM

技术规格