Sigma-Aldrich Polynucleotide Kinase from T4-infected Escherichia coli，10单位/μL，甘油缓冲水溶液

产品概述

10单位/μL，甘油缓冲水溶液

应用领域

适用于：通过5′-末端标记进行测序或核酸标记（DNA和RNA）寡核苷酸的5 ′磷酸化从磷酸化多核苷酸中去除3′-磷酸基团

生化/生理作用

多核苷酸激酶催化ATP的γ-磷酸转移到单链和双链核酸的5 ′羟基末端的"正向反应"（DNA和RNA）和3 ′-核苷单磷酸。在含有ADP的交换反应中，该酶将催化5 ′-末端磷酸基团和ATP的交换。3 ′-磷酸酶活性使该酶能够去除3 ′-1.正向反应：标记的γ-磷酸从（γ-32 P）-ATP转移到底物的游离5 ′-羟基上。5 ′-HO-DNA+（γ-32 P）-ATP → 5 ′-32 PO-DNA + ADP。羟基需要碱性磷酸酶预先去磷酸化。2.交换反应：首先，末端5 ′-磷酸从底物转移到反应混合物中存在的ADP。5 ′-PO-DNA + ADP → 5 ′-HO-DNA + ATP 5 ′-HO-DNA+（γ-32 P）-ATP → 5 ′-32 PO-DNA + ADP

分析说明

Activity is determined in a reaction mixture containing 40 mM Tris-HCl (pH 7.5), with 10 mM MgCl2, 5 mM dithiothreitol, 0.5 mM 5′-OH polynucleotide ends, and mM [γ-32P]-ATP.

其他说明

T4多核苷酸激酶以50%甘油（v/v）、20 mM Tris-HCl（pH 7.5）、25 mM KCl、2 mM DTT、0.1 mM EDTA和0.1 μM ATP的溶液提供。

一个单位催化1纳摩尔的32 P在37 °C下30分钟内转移到微球菌核酸酶处理的DNA的5′端。

技术规格