Sigma-Aldrich ChemiSCREEN Membrane Preparation Recombinant Human APJ Apelin Receptor，用于放射性配体结合试验和GTPγS结合的人APJ GPCR膜制备。

产品概述

爱帕琳肽是一类由77个氨基酸组成的前体肽的N-末端衍生而来的不同大小的肽（前爱帕琳原）（细谷等人，Apelin受体（APJ）是一种G蛋白-由几个爱帕琳肽片段激活的偶联受体。APJ激活导致cAMP产生的抑制。已发现APJ和爱帕琳肽参与心血管功能调节（Katugampola等人，2001）和流体稳态已经确定爱帕琳系统在降低血压、作为有效的心脏正性肌力药、在调节垂体激素释放和食物和水摄入、在应激激活中以及作为从脂肪细胞分泌并调节胰岛素的新型脂肪因子中的广泛作用（Lee et al.，2006）。Millipore的APJ膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制剂，以确保高水平的GPCR表面表达;因此，本发明提供了一种方法，它们是筛选APJ激动剂和拮抗剂的理想HTS工具。膜制备物对（125 I）-Apelin的Kd为0.4 nM。125 I）-Apelin，5 μ g/孔APJ Membrane Prep通常产生大于20倍的信号背景比。

编码APJ的全长人AGTRL 1 cDNA

应用领域

放射性配体结合试验和GTP γ S结合。

生化/生理作用

GPCR Class：A

蛋白质目标：APJ

目标子家族：Apelin

产品特点

孵育条件将膜与放射性配体和未标记的竞争剂混合过滤前，将FC 96孔收获板置于非结合96孔板中的结合缓冲液中（测试的浓度参见图1和2），并孵育1-2小时。（Millipore目录号MAHF C1 H）用0.33%聚乙烯亚胺包被30分钟，然后用50 mM HEPES，pH 7.4，0.5%BSA洗涤。洗涤3次结合缓冲液：50 mM Hepes，pH 7.4，5 mM MgCl 2，1 mM CaCl 2，0.2% BSA，过滤并在4 ℃下储存放射性配体：（125 I）-Apelin。（Perkin Elmer#：NEX-393）洗涤缓冲液：50 mM Hepes，pH 7.4，500 mM NaCl，0.1% BSA，过滤并储存在4 ℃。一个包装含有足够用于至少200次测定（单位）的膜，其中单位是将产生大于20倍信号的膜的量：0.25 nM 125 I标记Apelin背景

物理形态

包装缓冲液中的液体：包装方法：将膜蛋白在1 ml包装缓冲液中调节至指定浓度，快速冷冻，并在-80 ℃下储存。

制备/使用说明

在-70 ° C下冷冻保存长达2年。不要冷冻和解冻。

分析说明

表1.信号：不同量的APJ膜制备物在竞争结合试验中获得的背景和特异性结合值。10 μg/孔5 μg/孔信号：背景33 50特异性结合（cpm）17297 15015规格：1单位= 5 μg膜制备物B（125 I）-爱帕琳结合的最大值：3.85 pmol/mg蛋白质（125 I）-爱帕琳结合的Kd：~0.4 nM

技术规格