Sigma-Aldrich ChemiSCREEN Membrane Preparation Recombinant Human CCK1 Cholecystokinin Receptor，用于放射性配体结合试验和GTPγS结合的人CCK 1/ CCKa GPCR膜制备。

产品概述

胆囊收缩素是一系列长度不等的肽由前胆囊收缩素原（5 ~ 58个氨基酸）衍生，存在于胃肠道组织和中枢神经系统中。胃泌素是一种与胆囊收缩素C-末端氨基酸相同的相关肽。两种GPCR，CCK 1（CCK A）和CCK 2（CCK B），与CCK和/或胃泌素结合以介导肽的生物学效应。CCK 1选择性地结合硫酸化CCK，而CCK-2与CCK和胃泌素的结合亲和力相似，配体与CCK-1的结合通过激活G q/外周CCK 1受体主要分布于胰腺、胆囊、幽门、肠等组织，负责调节各种消化过程，也存在于外周神经系统的某些区域在中枢神经系统中，它们介导CCK的饱足效应，调节多巴胺释放的增加，并拮抗阿片类镇痛Chemicon的CCK 1膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制剂，以确保高水平的GPCR表面表达;因此，本发明提供了一种方法，它们是筛选CCK-1拮抗剂及其配体的理想HTS工具，对（125 I）-CCK-1的Kd值为0.5nM。使用10.0 μ g/孔CCK 1膜制备物和0.5 nM（125 I）-CCK-8硫酸盐，获得大于4倍的信号背景比。

人CCK-1受体

应用领域

放射性配体结合试验和GTP γ S结合

生化/生理作用

GPCR Class：A

蛋白质靶标：CCK 1/ CCKa

靶标亚家族：胆囊收缩素

产品特点

孵育条件将膜与放射性配体和未标记的竞争剂混合（检测浓度见图1和图2），孵育1 - 2小时。过滤前，将FC 96孔收获平板（Millipore目录号MAHF C1H）用50mM HEPES，pH7.4，0.5%BSA封闭。洗涤3次注意：由于标记的硫酸化CCK-8的酸性，用PEI包被的滤板非特异性结合标记的配体，导致背景升高。结合缓冲液：50 mM Hepes，pH 7.4，5 mM MgCl 2，1 mM CaCl 2，0.2% BSA，过滤并储存在4 ℃放射性配体：（125 I）-CCK-8硫酸盐（Perkin Elmer #NEX203）洗涤缓冲液：50 mM Hepes，pH 7.4，500 mM NaCl，0.1% BSA，过滤并储存在4 ℃。

物理形态

一个包装包含足够用于至少200次测定（单位）的膜，其中单位是将产生大于4倍信号的膜的量：背景为0.5 nM的125 I标记的CCK-8。包装缓冲液中的液体：50 mM Tris，pH 7.4，10%甘油，不含防腐剂。包装方法：将膜蛋白在包装缓冲液中调节至指定浓度，快速冷冻，并储存在-80 ℃。

制备/使用说明

在-70 ° C下冷冻保存长达2年。不要冷冻和解冻。

分析说明

表1.信号：背景和特异性结合值，在竞争结合试验中获得，使用不同量的CCK 1受体膜制备物。10 μ g/孔5 μ g/孔信号：背景5.31 6.16特异性结合（cpm）1274.9 1691.4规格：1单位= 10 μ g膜制备物Bmax：0.15 pmol/mg Kd：0.5 nM

技术规格