Sigma-Aldrich ChemiSCREEN CRTH2膜制剂，用于放射性配体结合测定和GTP γ S结合的人CRTH 2/DP 2/GPR 44 GPCR膜制备。

产品概述

人CRTH2

在Th2细胞上表达的趋化因子受体同源分子（CRTH2）是与在Th2细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱性粒细胞和2型细胞毒性T细胞上高度表达的FPR样趋化因子受体相关的GPCR（Nagata et al., 1999）。 CRTH2最有效的配体是前列腺素PGD₂，一种主要的肥大细胞源性过敏介质（Hirai et al.，2001）。 PGD₂激活了另一个GPCR DP，并且阐明了DP和CRTH2对PGD₂介导的过敏性疾病的相对贡献。 CRTH2的小分子拮抗剂雷马曲班可减弱PGD₂-介导的支气管高反应性和抗原诱导的炎症（Sugimoto et al., 2003; Shichijo et al., 2003）。Chemicon ′CRTH2膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制备的粗膜制剂，以确保高水平的GPCR表面表达；因此，它们是筛选PGD₂/CRTH2相互作用拮抗剂的理想HTS工具。 膜制剂对[³H]-前列腺素D₂的Kd为10 nM。 使用2.5 μg/孔的CRTH2膜制剂和10 nM[³H]-前列腺素D₂，可获得大于5倍的信背比。

应用领域

放射性配体结合测定和GTPγS结合。

生化/生理作用

GPCR 类别：A

蛋白质靶标：CRTH2 / DP2 / GPR44

靶标亚家族：前列腺素类

产品特点

诱导条件
将膜与放射性配体和未标记竞争剂（检测浓度见图1和2）在非结合96孔板的结合缓冲液中混合，并培养1-2小时。过滤前，用0.33%聚乙烯亚胺包被FC 96孔收获板（Millipore 目录号MAHF C1H）30分钟，然后用50mM HEPES，pH值7.4，0.5%BSA洗涤。将结合反应物转移到滤板上，并用洗涤缓冲液洗涤3次（每次洗涤每孔1 mL）。将平板干燥并计数。
结合缓冲液：50mM HEPES，10mM MnCl2，1mM EDTA，0.2%BSA，pH值至7.0并过滤。
洗涤缓冲液：50mM HEPES，0.5 M NaCl，pH值至7.4并过滤。
放射性配体：[3H]前列腺素D2（Amersham#：TRK734）

包装信息

1 mL

物理形态

包装缓冲液中的液体：50 mM Tris pH值7.4、10%甘油和1%BSA，不含防腐剂。包装方法：将膜蛋白在1 ml包装缓冲液中调节至0.5 mg/ml，快速冷冻，并保存在-80°C下。

制备/使用说明

在 -70°C 下可冷冻保存长达 2年。 请勿冷冻和解冻。

分析说明

信号：在使用未标记前列腺素D₂的CRTH2膜制备物的竞争结合测定中获得的背景和特异性结合值。
10 g/孔
信号：背景12.2
特异性结合（cpm）4307

在使用CRTH2膜制备物的竞争结合测定中获得的配体的IC50值。
IC50（nM）前列腺素D₂ 4.5
13，14-二氢-15-酮前列腺素D₂ 14.7
BW A868C 7429

质量标准：1单位 = 10 g
Bmax：13.93 pmol/mg
Kd： 10 nM

技术规格