Sigma-Aldrich ChemiSCREEN CXCR4 Membrane Preparation，用于放射性配体结合测定和GTP γ S结合的人CXCR 4 GPCR膜制备。

产品概述

趋化因子SDF-1a与其GPCR受体CXCR 4具有一对一的特异性，这在趋化因子及其受体中是独一无二的，SDF-1a与造血和淋巴细胞上表达的CXCR 4结合，并指导它们运输和保留在造血和淋巴细胞生成器官和炎症部位CXCR 4在几种肿瘤细胞谱系上表达，并且可能负责转移到SDF-1 α表达部位，如骨和淋巴结此外，CXCR 4是HIV包膜糖蛋白gp 120的共受体（Feng等，1996）CXCR 4的小分子拮抗剂已经被开发出来，并显示出抑制T嗜性HIV株的感染性和损害脑肿瘤的生长（Arakaki et al.，1999; Rubin et al.，2003）. Chemicon的CXCR 4膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制剂，以确保高水平的GPCR表面表达;因此，在本发明中，它们是筛选CXCR 4和SDF-1a之间相互作用的拮抗剂的理想工具。1a与CXCR 4膜结合的Kd值为0.9 nM，与0.04-0.13 nM 125 I标记的SDF-1a的特异性结合窗口约为3倍。

全长人CXCR 4 cDNA

应用领域

放射性配体结合测定和GTP γ S结合。

生化/生理作用

蛋白质靶标：CXCR 4

产品特点

Inucbation Conditions
RECOMMENDED ASSAY CONDITIONS: Membranes are mixed with radioactive ligand and unlabeled competitor (see Figures 1 and 2 for concentrations tested) in binding buffer in a nonbinding 96-well plate, and incubated for 1-2 h. Prior to filtration, a GF/C 96-well filter plate is coated with 0.33% polyethyleneimine for 30 min, then washed with 50 mM HEPES, pH 7.4, 0.5% BSA. Binding reaction is transferred to the filter plate, and washed 3 times (1 mL per well per wash) with Wash Buffer. The plate is dried and counted.

Binding buffer: 50 mM Hepes, pH 7.4, 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0.2% BSA, filtered and stored at 4°C

Radioligand: [125I] SDF-1alpha (PerkinElmer#: NEX346)

Wash Buffer: 50 mM Hepes, pH 7.4, 500 mM NaCl , 0.1% BSA, filtered and stored at 4°C.

One vial contains enough membranes for at least 200 assays (units), where an unit is the amount of membrane that will yield greater than 4-fold signal:background with ¹²⁵I-labeled SDF-1alpha at 0.13 nM.

物理形态

包装缓冲液：包装方法：将膜蛋白在Iml包装缓冲液中调节至0.5mg/ml，快速冷冻，并储存在-80 ° C。

分析说明

表1.信号：CXCR 4膜制备物、0.13 nM 125 I-SDF-1α和未标记SDF-1α的稀释系列在竞争结合试验中获得的背景和特异性结合值。5 µg/孔信号：背景4.9特异性结合（cpm）9004质量标准：1单位= 5 μg Bmax（125 I）-SDF-1 α结合：1.6 pmol/mg蛋白（125 I）SDF-1 α结合的Kd：~ 0.9 nM

技术规格