Sigma-Aldrich ChemiSCREEN Membrane Preparation Recombinant Human ETB Endothelin Receptor，用于放射性配体结合试验和GTP γ S结合的人ETB GPCR膜制备。

产品概述

人ET B亚型1

The endothelin family of peptides are potent vasoconstrictors synthesized by endothelial cells in both constitutive and inducible pathways. The biological actions of endothelins are mediated by two GPCRs, ET_A and ET_B (Davenport, 2002). Whereas ET_A is the predominant receptor on smooth muscle cells and thus is the primary mediator of the vasoconstrictor activity, ET_B is found on endothelial cells and mediates vasodilation (Nilsson et al., 1997). In addition, ET_B has also been linked to renal failure, congestive heart failure, atherosclerosis, and pulmonary hypertension (D’Orléans-Juste, et al., 2002). A mutation in ET_B has been found to cause Hirschsprung disease-2, a degenerative disease of the digestive tract (Puffenberger et al, 1994). Millipore’s cloned human ET_B expressing cell line is made in the CHO host, which supports high levels of recombinant ET_B expression on the cell surface. Thus, the ET_B Membrane Preparation is an ideal tool for screening for compounds binding to ET_B. The membrane preparations exhibit a Kd of 0.03-0.06 nM for [¹²⁵I]-endothelin-1. With 0.2 nM [¹²⁵I]-endothelin-1, 10 μg/well ET_B Membrane Prep yields greater than 5 fold signal-to-background ratio.

应用领域

放射性配体结合试验和GTP γ S结合

生化/生理作用

GPCR Class：A

蛋白质靶标：ETB

靶亚家族：内皮素

产品特点

建议的试验条件：将膜与放射性配体和未标记的竞争剂混合过滤前，将FC 96孔收获板置于非结合96孔板中的结合缓冲液中（测试的浓度参见图1和2），并孵育1-2小时。（Millipore目录号MAHF C1 H）用0.33%聚乙烯亚胺包被30分钟，然后用50 mM HEPES，pH 7.4，0.5%BSA洗涤。洗涤3次结合缓冲液：50 mM Hepes，pH 7.4，5 mM MgCl 2，1 mM CaCl 2，0.2% BSA，过滤并在4 ℃下储存（Perkin Elmer#NEX259）洗涤缓冲液：50 mM Hepes，pH 7.4，500 mM NaCl，0.1%BSA，过滤并在4 ℃下储存。一个包装含有足够用于至少200次测定（单位）的膜，其中一个单位是将产生大于5倍信号的膜的量：0.25nM的125 I标记的内皮素-1的背景。

物理形态

一个包装包含足够用于至少200次测定（单位）的膜，其中一个单位是将产生大于5倍信号的膜的量：0.25 nM的125 I标记的内皮素-1的背景。包装缓冲液中的液体：50 mM Tris pH 7.4，10%甘油和1% BSA，不含防腐剂。将膜蛋白在包装缓冲液中调节至指定浓度，快速冷冻，并储存在-80 ° C。

制备/使用说明

在-70 ° C下储存。当按照指示储存时，产品自收到之日起至少6个月保持稳定。请勿冷冻和解冻。

分析说明

表1.信号：背景和特异性结合值，在竞争结合测定中用ET B膜制备物获得。10 μg/孔信号：背景7.4特异性结合（cpm）5704规格：1单位= 10 μg膜制备物Bmax：0.49 pmol/mg Kd：0.03-0.06 nM

技术规格