Sigma-Aldrich ChemiSCREEN Membrane Preparation Recombinant Human M2 Muscarinic Acetylcholine Receptor，用于放射性配体结合试验的人M2 GPCR膜制备。

产品概述

全长人CHRM 2 cDNA编码M2

毒蕈碱型乙酰胆碱受体（mAChR）家族由5个GPCR组成，M1、M3和M5受体与Gq偶联以动员胞内钙离子，M2和M4受体与Gi/o偶联以抑制cAMP的产生，它们介导乙酰胆碱在中枢神经系统和外周的神经传递（考尔菲尔德和Birdsall，1998）.在膀胱、气管和胃中，M2增强了M3促进收缩的功能，M2的激活用于抵消cAMP水平升高引起的舒张（Ehlert等，2005; Wess，2004）。此外，mAChR激动剂降低心率的能力似乎主要由M2介导。这些功能中的每一个都至少部分地由M2介导Chemicon的M2膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制剂，以确保GPCR的高水平表面表达;结果表明，该膜对（3 H）-东莨菪碱甲基氯化物（NMS）的Kd值为0.24nM，当M2膜制备液浓度为10 μg/孔，（3 H）-NMS浓度为0.5nM时，信号背景比大于3倍。

生化/生理作用

蛋白靶标：M2

产品特点

孵育条件将膜与放射性配体和未标记的竞争剂混合（检测浓度见图1和图2），孵育1-2小时。过滤前，将FC 96孔收获平板（Millipore cat. # MAHF C1 H）用0.33%聚乙烯亚胺包被30分钟，然后用4 mM Na 2 HPO 4，1 mM KH 2 PO 4，pH7.4洗涤。将结合反应转移到滤板上，洗涤3次结合和洗涤缓冲液：4 mM Na 2 HPO 4，1 mM KH 2 PO 4，pH7.4，过滤并储存于4°C放射性配体：（3 H）NMS（Perkin Elmer#：NEX-636）一个包装包含足够至少200次检测（单位）的膜，其中单位是将产生大于3倍信号的膜量：0.5 nM浓度下3 H标记NMS的背景

物理形态

包装缓冲液中的液体：50 mM Tris pH 7.4，10%甘油和1%BSA，无防腐剂。包装方法：在包装缓冲液中将膜蛋白调节至所示浓度，快速冷冻，并在-80 ℃下储存。

分析说明

表1.信号：背景和特异性结合值，在竞争结合试验中获得，使用M2膜制备物和未标记的阿托品。10 μg/孔信号：背景3.2特异性结合（cpm）606.8规格：1单位= 10 μg Bmax（3 H）-NMS结合：0.5 pmol/mg蛋白质Kd（3 H）-NMS结合：~0.24 nM

技术规格