Sigma-Aldrich ChemiSCREEN Human M3 Muscarinic Acetylcholine Receptor Membrane Preparation，用于放射性配体结合试验和GTPγS结合的人M3 GPCR膜制备。

产品概述

全长人CHRM 3 cDNA编码M3

毒蕈碱型乙酰胆碱受体（mAChR）家族由5个GPCR组成，M1、M3和M5受体与Gq偶联以动员胞内钙离子，M2和M4受体与Gi/o偶联以抑制cAMP的产生，它们介导乙酰胆碱在中枢神经系统和外周的神经传递（Caulfield和Birdsall，1998）。M3在平滑肌中显著表达，并在介导mAChR激动剂诱导的收缩中起主要作用。缺乏M3的小鼠瞳孔扩大，这表明M3在调节瞳孔括约肌张力中起作用。此外，Msub3在摄食中起作用，如M3缺失小鼠的消瘦和摄食不足表型所示Chemicon的M3膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制剂，以确保高水平的GPCR表面表达;因此，本发明提供了一种方法，它们是筛选M3与4-DAMP相互作用的拮抗剂的理想HTS工具。膜制剂对（3H）-4-DAMP的Kd为0.72-1 nM。在0.75nM（3H）-4-DAMP和0.75nM（3H）-4-DAMP的混合液中，可获得大于4倍的信号背景比。

应用领域

用于放射性配体结合试验和GTPγS结合的人M3 GPCR膜制备。

放射性配体结合试验和GTP γ S结合。

生化/生理作用

GPCR Class：A

蛋白靶标：M3

靶亚家族：乙酰胆碱（毒蕈碱）

产品特点

孵育条件将膜与放射性配体和未标记的竞争剂混合在过滤之前，将GF/C 96孔滤板用0.33%聚乙烯亚胺包被30分钟，然后用50 mM HEPES（pH 7.4）洗涤，0.5%BSA，将结合反应物转移至滤板上，洗涤3次结合缓冲液：50 mM Hepes，pH 7.4，5 mM MgCl 2，1 mM CaCl 2，0.2% BSA，过滤并在4 ℃下储存。（3 H）-4-DAMP（Perkin Elmer#：NET 1040）洗涤缓冲液：50 mM Hepes，pH 7.4，500 mM NaCl，0.1% BSA，过滤并储存在4 ℃。一个包装含有足够用于至少200次测定（单位）的膜，其中单位是将产生大于4倍信号的膜的量：0.75 nM的3 H标记的4-DAMP的背景

物理形态

包装缓冲液中的液体：50 mM Tris pH 7.4，10%甘油和1% BSA，无防腐剂。包装方法：将膜蛋白用1 mL包装缓冲液调节至0.5 mg/ml，迅速冷冻，-80 ° C保存。

制备/使用说明

在-70 ° C下冷冻保存长达2年。不要冷冻和解冻。

分析说明

信号：在竞争结合试验中使用不同量的M3膜制备物获得的背景和特异性结合值：20 μg/孔10 μg/孔信号：背景5.17 5.10特异性结合（cpm）1224 1030规格：1单位= 10 μg Bmax：3.75 pmol/mg Kd：0.86 nM

技术规格