Sigma-Aldrich ChemiScreen Membrane Preparation Recombinant Human M5 Muscarinic Acetylcholine Receptor，用于放射性配体结合试验和GTP γ S结合的人M5 GPCR膜制备。

产品概述

全长人CHRM 5 cDNA，编码M5

毒蕈碱型乙酰胆碱受体家族由5个GPCRs组成，它们介导乙酰胆碱在中枢神经系统和外周的某些神经传递功能，其中M5受体与M1和M3受体沿着通过Gq/11和随后从内质网释放Ca++发出信号（考尔菲尔德和Birdsall，1998）.尽管M5在CNS中以相对低的水平表达，但它似乎是在中脑多巴胺能神经元中表达的唯一毒蕈碱乙酰胆碱受体，并且已经显示它介导这些神经元的多巴胺释放。M5受体也在大脑和外周的血管中表达，对M5基因敲除小鼠的研究表明，M5介导乙酰胆碱对脑微血管的血管舒张作用。对M5基因敲除小鼠的进一步研究也表明，M5在可卡因的奖励效应中发挥作用，吗啡Chemicon的M5膜制备物是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制备物，以确保高水平的GPCR表面表达;因此，在本发明中，它们是筛选M5与配体相互作用的理想HTS工具，膜制备物对（3 H）-东莨菪碱甲基氯（NMS）的Kd为0.16nM，在10 μg/孔M5 Membrane Prep和1 nM（3 H）-NMS，获得大于5倍的信号背景比。

应用领域

放射性配体结合试验和GTP γ S结合。

生化/生理作用

GPCR Class：A

蛋白靶标：M5

靶亚家族：乙酰胆碱（毒蕈碱）

产品特点

Inucbation Conditions
Membranes are mixed with radioactive ligand and unlabeled competitor (see Figures 1 and 2 for concentrations tested) in binding buffer in a nonbinding 96-well plate, and incubated for 1-2 h. Prior to filtration, a GF/C 96-well filter plate is coated with 0.33% polyethyleneimine for 30 min, then washed with 50mM HEPES, pH 7.4, 0.5% BSA. Binding reaction is transferred to the filter plate, and washed 3 times (1 mL per well per wash) with Wash Buffer. The plate is dried and counted. Binding buffer: 50 mM Hepes, pH 7.4, 5 mM MgCl_{2, 1 mM CaCl2, 0.2% BSA, filtered and stored at 4°C Radioligand: [3H] NMS (Perkin Elmer#:NEX-636 )
Wash Buffer: 50 mM Hepes, pH 7.4, 500 mM NaCl , 0.1% BSA, filtered and stored at 4°C.
One package contains enough membranes for at least 200 assays (units), where a unit is the amount of membrane that will yield greater than 5-fold signal:background with 3H-labeled NMS at 1 nM}

物理形态

包装缓冲液中的液体：包装方法：将膜蛋白在ImL包装缓冲液中调节至0.5mg/mL，快速冷冻，并在-80 ° C下储存。

制备/使用说明

在-70 ° C下冷冻保存长达2年。不要冷冻和解冻。

分析说明

Bmax：2.49 pmol/mg; Kd：0.16 nM 1单位= 10 μ g

技术规格