Sigma-Aldrich ChemiSCREEN Membrane Preparation Recombinant Human MrgD Mas-Related Gene Family Receptor，用于放射性配体结合试验和GTP γ S结合的人MRGPRD/MrgD GPCR膜制备。

产品概述

编码MrgD的全长人MRGPRD cDNA

MAS相关基因（Mrgs），也称为感觉神经元特异性G蛋白偶联受体（SNSRs），选择性地在参与疼痛感知的感觉神经元亚群中表达（Dong等人，2001）。啮齿类动物中的Mrg家族由MrgA-MrgH亚家族中的50种受体组成，但人类的Mrg成员较少。（也称为TGR 7）在从啮齿动物到人类的物种中发现，并且其表达限于非肽能的，小直径的，IB4+背根神经节（DRG）神经元. MrgD结合β-丙氨酸，但不结合L-丙氨酸，这导致细胞内钙增加和毛喉素诱导的cAMP产生的抑制，从而表明与Gq和Gi蛋白偶联（Shinohara等，2004）。β-丙氨酸诱导的MrgD激活抑制过表达MrgD和KCNQ 2/3的细胞中以及培养的DRG神经元中的KCNQ 2/3介导的M电流，这表明MrgD增强伤害性信号传导（Crozier et al.，2007）。Millipore的MrgD膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制剂，以确保高水平的GPCR表面表达;因此，在本发明中，它们是筛选MrgD与其配体相互作用的理想HTS工具。该细胞系对β-膜制备物在GTP α S结合测定中表现出β-丙氨酸的EC50为69 μ M。

应用领域

放射性配体结合试验和GTP γ S结合。

生化/生理作用

GPCR Class：A

蛋白质靶点：MRGPRD / MrgD

靶亚家族：Mas相关基因

产品特点

激发条件试验条件：通过加入等质量浓度的皂苷使膜透化，然后与（35 S）-GTPγS混合（终浓度为0.3nM）在20 mM HEPES中，pH 7.4/100 mM NaCl/10 mM MgCl 2 /0.5 μM GDP，加入未标记的β-丙氨酸至图1所示的终浓度（最终体积为100 μL），并在30°C下孵育30 min。将结合反应转移至GF/B滤板中（Millipore MAHF B1 H）预先用水润湿。将板洗涤3次（每次洗涤每孔1 mL）用冷的10 mM磷酸钠，pH 7.4，然后干燥并计数。一个小瓶含有足够用于至少200次测定（单位）的膜，其中一个单位是将产生大于1000 cpm的特异性β-丙氨酸刺激（35 S）的膜量。GTPγS结合。预计MrgD膜制备物在放射性配体结合试验中具有功能;然而，最终用户需要确定与本产品一起使用的最佳放射性标记配体。

物理形态

包装缓冲液中的液体：包装方法：将膜蛋白在1 ml包装缓冲液中调节至1 mg/ml，快速冷冻，并在-80 ℃下储存

制备/使用说明

在-70 ° C下冷冻保存长达2年。不要冷冻和解冻。

分析说明

质量标准：1单位= 5 µ g膜制备液在β-丙氨酸GTP γ S结合试验中的EC50：~69 μ M

技术规格