Sigma-Aldrich ChemiSCREEN Human PAC1-long Receptor Membrane Preparation，用于放射性配体结合试验和GTP γ S结合的人PAC1长同种型/PACAP GPCR膜制备。

产品概述

人ADCYAP 1 R1基因编码PAC 1长亚型的cDNA

PACAP垂体腺苷酸环化酶激活肽（pituitary adenylyl cyclase-activating peptide，PACAP）是一种与血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）相关的多肽，有2种形式，分别由27或38个氨基酸组成，与PACAP结合的有3种B类GPCR：PAC 1、VPAC 1和VPAC 2;然而，VPAC 1和VPAC 2对VIP亲和力比PAC 1高得多（Vaudry等，2000）。PAC 1的几种剪接变体产生在N-末端和第三胞内环不同的蛋白质;这些变异体对PACAP的亲和力和激活G q和Gs的能力不同。PAC 1在CNS和肾上腺髓质中高表达。对PAC 1缺失小鼠的研究表明PAC 1在昼夜节律，中性粒细胞迁移，和肺血管张力（汉尼拔等，2001; Martinez等，2005; Otto等，2004）. Chemicon的PAC 1长膜制备物是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制备物，以确保高水平的GPCR表面表达;因此，在本发明中，它们是筛选PAC 1 -long与PACAP 27相互作用的拮抗剂的理想HTS工具。膜制备物对（125 I）-PACAP 27的Kd为2.7 nM。用5 μg/孔PAC 1 -long Membrane Prep和0.75 nM（125）-PACAP 27，获得大于20倍的信号背景比。

应用领域

放射性配体结合测定和GTPγS结合。

生化/生理作用

GPCR类别：B

蛋白靶标：PAC 1 long isoform / PACAP

目标子系列：VIP/PACAP

产品特点

将膜与放射性配体和未标记的竞争剂混合在过滤之前，将GF/C 96孔滤板用0.33%聚乙烯亚胺包被30分钟，然后用50 mM HEPES（pH 7.4）洗涤，将结合反应转移至滤板，并洗涤3次结合缓冲液：50 mM Hepes，pH 7.4，5 mM MgCl 2，1 mM CaCl 2，0.2% BSA，过滤并在4 ℃下储存。（125 I）PACAP 27（Perkin Elmer#NEX294）洗涤缓冲液：50 mM Hepes，pH 7.4，500 mM NaCl，0.1% BSA，过滤并储存在4 ℃。一个包装含有足够用于至少200次测定（单位）的膜，其中一个单位是将产生大于20倍信号的膜的量：0.75 nM的125 I标记的PACAP 27的背景。

物理形态

包装缓冲液中的液体：包装方法：将膜蛋白在包装缓冲液中调节至指定浓度，快速冷冻，并在-80 ° C下储存。

制备/使用说明

在-70 ° C下冷冻保存长达2年。不要冷冻和解冻。

分析说明

信号：使用不同量的PAC 1-长膜制备物在竞争性结合试验中获得的背景和特异性结合值：10 µg/孔5 µg/孔信号：背景22.9 29特异性结合（cpm）63650 62987规格：1单位= 5 µg膜制备物Bmax：52.0 pmol/mg Kd：2.7 nM

技术规格