Sigma-Aldrich ChemiScreen Recombinant HumanMembrane Preparation α1A Adrenergic Receptor，用于放射性配体结合试验和GTP γ S结合的人α 1A GPCR膜制备。

产品概述

人α1A

内源性儿茶酚胺肾上腺素和去甲肾上腺素对平滑肌活动、心脏功能、糖和脂肪代谢、激素分泌、神经递质释放和中枢神经系统活动具有重要影响，这些活动由α和β肾上腺素受体两个亚家族的GPCR介导（Bylund等，1994）。肾上腺素受体α1亚类的三个成员α 1 A、α 1 B和α 1 D与Gq偶联，并促进血管和尿道平滑肌的收缩、肠平滑肌的松弛、心脏收缩力的增加，不同的亚型有重叠的分布，并根据物种和组织的不同，α1A亚型在泌尿生殖道平滑肌收缩和肾动脉收缩中起重要作用（Hrometz等，1999; Ruffolo和Hieble，1999）α1肾上腺素受体的活化也影响细胞增殖; α1A通过阻止G1/S转变抑制细胞生长（柴田等，2003）. Chemicon的α1A膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制剂，以确保高水平的GPCR表面表达;结果表明，α 1AMembrane Prep和（3 H）-哌唑嗪的Kd值为1.34 nM，当α 1AMembrane Prep和（3 H）-哌唑嗪浓度分别为5 μg/孔和1 nM时，信号背景比大于7倍。

应用领域

放射性配体结合测定和GTPγS结合。

生化/生理作用

GPCR Class：A

蛋白质靶标：alpha 1A

目标子家族：肾上腺素能

产品特点

Inucbation Conditions
Membranes are mixed with radioactive ligand and unlabeled competitor (see Figures 1 and 2 for concentrations tested) in binding buffer in a nonbinding 96-well plate, and incubated for 1-2 h. Prior to filtration, a GF/C 96-well filter plate is coated with 0.33% polyethyleneimine for 30 min, then washed with 50mM HEPES, pH 7.4, 0.5% BSA. Binding reaction is transferred to the filter plate, and washed 3 times (1 mL per well per wash) with Wash Buffer. The plate is dried and counted.

Binding buffer: 50 mM Hepes, pH 7.4, 5 mM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 0.2% BSA, filtered and stored at 4°C


Radioligand: [3H] prazosin (Perkin Elmer # NET823)


Wash Buffer: 50 mM Hepes, pH 7.4, 500mM NaCl , 0.1% BSA, filtered and stored at 4°C.

物理形态

一个包装包含足够用于至少200次测定（单位）的膜，其中一个单位是将产生大于7倍信号的膜的量：1 nM的3 H标记哌唑嗪的背景。包装缓冲液中的液体：50 mM Tris pH 7.4，10%甘油和1% BSA，不含防腐剂。将膜蛋白在包装缓冲液中调节至指定浓度，快速冷冻，并储存在-80 ° C下。

制备/使用说明

在-70 ° C下冷冻保存长达2年。不要冷冻和解冻。

分析说明

规格说明：信号：使用不同量的α1A膜制备物10 µg/孔5 µg/孔在竞争性结合试验中获得的背景和特异性结合值信号：背景10.7 9.6特异性结合（cpm）3244 2530 1单位= 5 µg膜制备物Bmax：11.02 pmol/mg Kd：1.34 nM

技术规格