Sigma-Aldrich ChemiSCREEN Human α2A Adrenergic Receptor Membrane Preparation，用于放射性配体结合试验和GTPγS结合的人α 2A GPCR膜制备。

产品概述

编码α 2A的全长人ADRA 2A转录变体1 cDNA

内源性儿茶酚胺肾上腺素和去甲肾上腺素对平滑肌活动、心脏功能、糖和脂肪代谢、激素分泌、神经递质释放和中枢神经系统活动具有重要影响，这些活动由α和β肾上腺素受体两个亚家族的GPCR介导由α 2A、α 2B和α 2C组成的α 2肾上腺素能受体亚家族成员主要与Gi偶联以抑制cAMP产生，α 2A选择性激动剂和α 2A缺乏小鼠实验表明，α 2A激活可导致低血压、镇静、镇痛和体温降低（Kable et al.，2000）. Chemicon的α 2A膜制备物是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗膜制备物，以确保高水平的GPCR表面表达;因此，本发明提供了一种方法，它们是筛选α 2A激动剂和拮抗剂的理想HTS工具。膜制备物对（3 H）-MK-912的Kd为5.4nM。3 H）-MK-912，5 µg/孔α 2A Membrane Prep通常产生大于20倍的信号背景比。

应用领域

用于放射性配体结合试验和GTPγS结合的人α 2A GPCR膜制备。

放射性配体结合试验和GTP γ S结合。

生化/生理作用

GPCR Class：A

蛋白质靶标：alpha 2A

目标子家族：肾上腺素能

产品特点

Inucbation Conditions
Membranes are mixed with radioactive ligand and unlabeled competitor (see Figures 1 and 2 for concentrations tested) in binding buffer in a nonbinding 96-well plate, and incubated for 1-2 h. Prior to filtration, an FC 96-well harvest plate (Millipore cat. # MAHF C1H) is coated with 0.33% polyethyleneimine for 30 min, then washed with 50mM HEPES, pH 7.4, 0.5% BSA. Binding reaction is transferred to the filter plate, and washed 3 times (1 mL per well per wash) with Wash Buffer. The plate is dried and counted.

Binding buffer: 50 mM Hepes, pH 7.4, 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0.2% BSA, filtered and stored at 4°C
Radioligand: [3H] MK-912 (Perkin Elmer#: NET-1059)
Wash Buffer: 50 mM Hepes, pH 7.4, 500mM NaCl , 0.1% BSA, filtered and stored at 4°C.

物理形态

一个包装含有足够用于至少200次测定（单位）的膜，其中单位是将产生大于20倍信号的膜的量：5 nM 3 H标记MK-912的背景包装缓冲液中的液体：50 mM Tris pH 7. 4，10%甘油和1% BSA，不含防腐剂。

制备/使用说明

在-70 ° C下冷冻保存长达2年。不要冷冻和解冻。

分析说明

Table 1. Signal:background and specific binding values obtained in a competition binding assay with α_2A membrane prep and unlabeled rauwolscine. 10 µg/well 5 µg/well Signal:Background 28.97 34.14 Specific Binding (cpm) 11777 9147


SPECIFICATIONS: 1 unit = 5 µg
Bmax for [3H] MK-912 binding: 71.4 pmol/mg protein
Kd for [3H] MK-912 binding: ~5.4 nM

技术规格