Sigma-Aldrich ChemiSCREEN Human Motilin Receptor Membrane Preparation，人胃动素受体/MTLR/GPR38 GPCR膜制备用于放射性配体结合试验和GTP γ S结合。

产品概述

人胃动素受体

胃动素是一种由22个氨基酸组成的多肽，具有强烈的胃肠道收缩作用，其生物学效应是由一个G q偶联的七跨膜蛋白介导的，目前被称为胃动素受体（motilin receptor，MR），其序列与ghrelin受体有很大的相似性胃动素受体也被抗生素红霉素激活;这种相互作用似乎介导了红霉素的一些胃肠道副作用。（红霉素的非抗生素衍生物）如ABT-229已经被研究用于治疗糖尿病胃轻瘫，其有效性受到快速耐受的限制（对配体的反应降低）由受体下调引起（Thielemans等人，具有降低的去敏感活性的胃动素受体激动剂仍然是胃动力障碍的潜在治疗。表达细胞系在Chem-1宿主中制备，其支持细胞表面上高水平的重组胃动素受体表达，并含有高水平的混杂G蛋白Gα15以将受体偶联至钙信号传导途径。该细胞系是筛选胃动素受体及其配体相互作用拮抗剂的理想工具由我们专有的稳定重组细胞系制成的膜制剂，以确保高水平的GPCR表面表达;结果表明，膜制备物对（125 I）-Motilin的Kd值为0.43nM，当膜制备物浓度为5.0 μg/孔，（125 I）-Motilin浓度为0.5nM时，获得大于30倍的信号背景比。

应用领域

放射性配体结合测定和GTPγS结合。

生化/生理作用

GPCR Class：A

Protein Target：MTLR/GPR38

目标子家族：胃动素

产品特点

Inucbation Conditions
Membranes are mixed with radioactive ligand and unlabeled competitor (see Figures 1 and 2 for concentrations tested) in binding buffer in a nonbinding 96-well plate, and incubated for 1-2 h. Prior to filtration, a GF/C 96-well filter plate is coated with 0.33% polyethyleneimine for 30 min, then washed with 50mM HEPES, pH 7.4, 0.5% BSA. Binding reaction is transferred to the filter plate, and washed 3 times (1 mL per well per wash) with Wash Buffer. The plate is dried and counted.

Binding buffer: 50 mM Hepes, pH 7.4, 5 mM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 0.2% BSA, filtered and stored at 4°C
Radioligand: [125I] Motilin (Perkin Elmer # NEX378)
Wash Buffer: 50 mM Hepes, pH 7.4, 500mM NaCl , 0.1% BSA, filtered and stored at 4°C.
One package contains enough membranes for at least 200 assays (units), where an unit is the amount of membrane that will yield greater than 30-fold signal:background with ¹²⁵I-labeled motilin at 0.5 nM.

物理形态

包装缓冲液中的液体：包装方法：将膜蛋白在包装缓冲液中调节至指定浓度，快速冷冻，并在-80 ° C下储存。

制备/使用说明

在-70 ° C下冷冻保存长达2年。不要冷冻和解冻。

分析说明

信号：在竞争结合测定中用不同量的胃动素受体膜制备物获得的背景和特异性结合值：5 μ g/孔10 μ g/孔信号：背景特异性结合（cpm）4634854457规格：1单位= 5 μ g膜制备物Bmax：5. 6 pmol/mg Kd：0. 43 nM

技术规格